作者：顾静文; 张弢; 陈波斌; 吕元; 林果为rna干扰基因mdr1细胞株抗药性多药
摘要：目的 研究发夹状小分子干扰RNA（small RNA interference，siRNA）对白血病多药耐药细胞株K562／A02多药耐药基因（mdr1）和谷胱甘肽S-转移酶（GSTπ）基因功能的影响。方法 以mdr1 mRNA第79～99和GSTπ mRNA第308～327核苷酸为作用靶点，合成针对靶区域序列的发夹状siRNA，克隆入pSilencer2．1-U6neo，克隆产物为pSilence mdr1和pSilence GSTπ，转染K562／A02细胞株。用Western blot和荧光免疫组化法观察P糖蛋白（P-gP）和GSTπ蛋白的表达；MTT法检测阿霉素对K562／A02细胞半数抑制浓度（IC50）。结果 Western blot检测显示转染pSilence mdr1和pSilence GSTπ的K562／A02细胞株与K562／A02细胞对照组相比，P-gP和GSTπ的表达明显下降，分别从0．75±0．02和0．54±0．02下降到0．48±0．05和0．39±0．02（P值均〈0．01），α-微管蛋白的表达没有变化；转染pSilence核纤层蛋白A／C的K562／A02细胞株与对照组相比，核纤层蛋白A／C表达明显下降，但P-gP和GSTπ的表达不变；荧光免疫组化显示P-gP和GSTπ阳性细胞比例从转染前的（71．25±9．65）％和（81．25±6．49）％下降到转染后的（35．25±5．97）％和（41．25±4．43）％（P值均〈0．01）；转染空载体后K562／A02细胞对阿霉素的耐药指数为23，转染pSilence mdr1和pSilence GSTπ后分别下降为8和10，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 siRNA可有效、特异地逆转K562／A02细胞株mdr1和GSTπ的多药耐药性。
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