作者：付斌; 陈方平; 夏昆; 傅敢; 刘巍; 黄细莲...b基因突变血小板膜糖蛋白正常转运表达影响ch0高尔基体细胞
摘要：目的探讨血小板膜糖蛋白αⅡb基因A2334C突变对αⅡbβ3复合物合成的影响.方法构建αⅡb基因A2334C真核表达载体,测序正确后用脂质体将其与表达人整合素β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO细胞,对转染后细胞用Western blot法鉴定αⅡb基因A2334C突变体在CHO细胞中的总体表达;用流式细胞仪分析转运至细胞膜表面的αⅡb基因A2334C亚基;为了明确突变亚基的亚细胞定位,构建了αⅡb基因A2334C GFP融合蛋白表达质粒并用激光共聚焦显微镜确定GFP融合蛋白的细胞内定位.结果Western blot证明转基因CHO细胞有αⅡb A2334C基因的表达,但是成熟αⅡb的比例较正常对照低;流式细胞仪检测发现在细胞膜上有该亚基的分布,但是只有正常的25%;进一步的融合蛋白细胞内定位研究显示,αⅡb基因A2334C GFP可以由内质网转运至高尔基体.结论αⅡb基因A2334C突变没有影响αⅡb的合成及其与β3的结合,但是仅有少部分前体αⅡb能够进一步形成成熟的αⅡb,其膜上的表达仅为正常的25%.该突变不影响αⅡb β3由内质网向高尔基体的转运.该突变的致病机制可能是αⅡb的折叠错误使其容易降解导致膜上αⅡb β3复合物减少及血小板功能减弱.
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