作者：张敏; 刘芳; 游泳; 何伟; 邹萍; 陈智超; ...锤头状核酶细胞凋亡fas抗体细胞杀伤活性fas基因抑制转染体外杀伤活性酶基因rna
摘要：目的研究抗fas的锤头状核酶对小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)系CTLL-2细胞fas基因的表达及其介导的细胞凋亡抑制作用,探索供者淋巴细胞输注(DLI)时增强T细胞抗白血病的新途径.方法设计并合成抗fas的锤头状核酶基因,将其导入CTLL-2细胞,通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪分别检测核酶对CTLL-2细胞fas mRNA和Fas蛋白表达的抑制,以MTT法检测CTLL-2细胞与Fas抗体结合后的增殖活性,以半胱天冬酶3(caspase-3)活性检测试剂盒检测细胞caspase-3蛋白酶活性,以流式细胞仪检测细胞凋亡,以乳酸脱氢酶法检测CTLL-2细胞的体外杀伤活性. 结果锤头状核酶基因导入CTLL-2细胞后,可使其表面的Fas表达降低达50%,细胞经Fas抗体(JO2)处理后,与空白对照、转染空载体的细胞相比,转染核酶的细胞增殖活性增加了1倍,caspase-3活性降低近50%,而细胞的凋亡率显著降低,只有37%,且CTLL-2细胞的体外杀伤活性为对照组的2倍. 结论该核酶具有切割fas基因的良好活性,并可抑制Fas介导的CTLL-2细胞凋亡,增加该细胞存活率,从而增强对Yac-1细胞的杀伤活性.
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