作者：方峻; 魏文宁; 夏凌辉; 宋善俊人卵巢癌细胞系tf细胞数体内转染细胞裸鼠高效表达dna重组mrna水平
摘要：目的研究组织因子/活化因子Ⅶ(TF/FⅦa)复合物对人卵巢癌细胞体外侵袭能力及体内转移能力的影响.方法①采用分子克隆及基因转染技术构建高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2780/TF;②采用Boyden小室法计数FⅦa刺激后A2780、A2780/TF穿透Matrigel迁移到PVPF膜背面的细胞数;③建立人卵巢癌细胞转移的实验动物模型,研究TF对人卵巢癌细胞在裸鼠体内形成转移灶的能力.结果①经分子克隆技术构建得到pcDNA3-TF cDNA重组体;②稳定转染的A2780/TF细胞内TF mRNA水平显著增高:转染细胞为3.99±0.15,未转染细胞为0.97±0.23(P＜0.01);转染细胞表面TF表达也显著增高:转染细胞中约(48.56±9.53)%细胞表面有TF抗原,而未转染细胞中仅(2.73±1.15)%(P＜0.01);③A2780/TF细胞穿膜细胞数为157.3±19.2,经FⅦa刺激后穿膜细胞数显著增多,为447.7土39.4(P＜0.01);与FⅦa和抗TF单抗共孵育的A2780/TF,穿膜细胞数接近刺激前的基础水平;④种植A2780细胞的裸鼠中22.2%可见肺部转移灶,种植A2780/TF细胞的裸鼠中88.9%发生肺转移(P＜0.01).结论①将所构建的TF真核表达载体转入人卵巢癌细胞系,获得稳定、高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2780/TF,为研究TF在肿瘤侵袭、转移中的作用及其机制,探索抑癌基因治疗新途径建立了初步的实验基础;②TF可通过与FⅦa形成复合物而增强人卵巢癌细胞的体外侵袭能力及体内转移能力.
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