作者：范祥明; 刘迎龙; 王强; 于存涛; 魏波脱噬作用体外循环肺再灌注损伤中性粒细胞凋亡体外循环后肺损伤减轻流式细胞仪检测低分子右旋糖酐
摘要：目的观察诱导中性粒细胞(PMN)凋亡对体外循环(CPB)后肺脏损伤的保护作用.方法在体外实验中,Percoll细胞分离液梯度密度离心得PMN,培养48 h,实验组加入不同浓度的克拉霉素(5、10、20 μg/ml).台盼蓝染色,镜下观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞凋亡率.免疫组化法观察PMN凋亡相关基因蛋白Fas和bcl-2的表达情况.在体内实验中,将12只绵羊随机分为低分子右旋糖酐肺动脉灌注组(对照组)和低分子右旋糖酐+克拉霉素肺动脉灌注组(实验组).建立CPB后经肺动脉灌注肺保护液,CPB 90 min后撤离CPB.观察呼吸功能,检测细胞因子浓度,并观察肺组织形态学改变及肺内PMN凋亡情况. 结果克拉霉素明显缩短PMN的生存期.流式细胞仪检测显示,实验组24 h凋亡率1、5、10和20 μg/ml浓度组分别为(33.7±4.9)%、(48.0±4.9)%、(52.0±5.4)%和(53.0±7.1)%,明显高于对照组的(31.5±3.5)%(P＜0.01);免疫组化染色显示实验组Fas的表达较对照组高,而bcl-2的表达低于对照组(P＜0.01);体内实验结果显示,实验组肺血管阻力[(10.22±1.44) kPa·s·L-1]低于对照组[(20.26±4.71) kPa·s·L-1,P＜0.01],而动脉血氧指数[(188±48) mm Hg]较对照组[(123±62) mm Hg,P＜0.05]高.实验组支气管肺泡灌洗液内细胞因子白细胞介素-8和肿瘤细胞因子均低于对照组(P＜0.05).形态学观察表明实验组肺损伤较对照组轻.对照组肺内中性白细胞凋亡率为29%,实验组凋亡率达73%(P＜0.01).结论克拉霉素能诱导PMN凋亡,减轻CPB所造成的肺脏损伤.
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