作者：边昶; 赵葵; 童国新; 朱永良; 陈鹏人脐静脉内皮细胞端粒酶催化亚单位永生化sv40大t抗原端粒酶活性转染猿猴异位表达脂肪酶
摘要：目的用端粒酶催化亚单位(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40大T)异位表达建立永生化人脐静脉内皮细胞系. 方法构建含有hTERT和SV40大T cDN段的逆转录病毒载体,转染人原代脐静脉内皮细胞,连续传代培养.通过细胞免疫组织化学观察、Western blot分析hTERT和SV40大T抗原表达、PCR-ELISA检测端粒酶活性、ELISA分析内皮特异性E-选择素和RT-PCR测定内皮细胞脂肪酶进行细胞形态学和功能学鉴定.结果转染的人脐静脉内皮细胞为扁平多角形,呈单层铺路石状镶嵌排列.有Ⅷ因子、SV40大T、hTERT表达、E-选择素和内皮细胞脂肪酶表达阳性.转染细胞中端粒酶活性经测定在第12代时为0.36, 在第50代时为0.38, 而对照的原代细胞在第1代时为1.12,第3代时仅为0.06.结论导入外源性端粒酶催化亚单位和SV40大T抗原能使人脐静脉内皮细胞永生化,保持内皮细胞性状不改变.
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