作者：李宇; 廉姜芳; 崔长琮; 赵永辉; 薛小临; ...先天性长qt综合征基因突变功能表达
摘要：目的探讨HERG基因L539fs／47突变及A561V突变的功能。方法采用交叠聚合酶链式反应（PCR）及克隆载体快速PCR构建突变体，用限制性内切酶法将突变体克隆到真核表达载体pcDNA3中，用Superfect转染试剂将野生型及突变型HERG质粒与荧光载体pRK5-GFP共转染至HEK293细胞，用免疫荧光化学法及蛋白免疫印记法检测蛋白质表达，用全细胞膜片钳法检测HERG通道的电流表达。结果构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因L539fs／47缺失突变及A561V点突变，L539fs／47突变体蛋白质位于细胞膜上，A561V突变体蛋白质位于细胞膜上及细胞浆中，L539fs／47突变体蛋白质条带小于80kDa，A561V突变蛋白仅有135kDa一条蛋白条带，野生型通道记录到尾电流而L539fs／47突变及A561V突变型通道均未检测到电流表达。结论成功构建并表达了HERG基因L539fs／47突变及A561V突变的功能，L539fs／47突变通过电压门控异常机制抑制HERG电流，而A561V突变通过滞留降解及膜通道功能异常机制抑制HERG电流。
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