作者：万世奇; 张太平; 王天笑; 郑莲芳; 李方; ...胰腺肿瘤表皮生长因子受体重组腺相关病毒载体
摘要：目的构建能在体内长期表达抗表皮生长因子受体（EGFR）抗体的重组腺相关病毒（rAAV）载体，观察其对人胰腺癌细胞株的抑制作用。方法将抗人EGFR单链抗体可变区（SCFV）基因插入腺相关病毒载体的Kpn Ⅰ和Bgl Ⅱ位点，构建成含抗EGFR单链抗体基因的重组腺相关病毒载体（rAAV-anti EGFR）。设立对照组（rAAV1-EGFP组）和实验组（rAAV1-anti EGFR组），观察抗EGFR单链抗体蛋白的表达情况。采用Western blot检测抗体蛋白的表达、CCK-8法和流式细胞仪检测6种人胰腺癌细胞株（PCT-3、SWl990、Capan-1、ASPC-1、MiaPaCa-2及PANC-1细胞）的抑制率和凋亡率。两组比较采用t检验。结果抗EGFR单链抗体蛋白能在6种人胰腺癌细胞株中表达，对照组和实验组胰腺癌ASPC-1细胞抑制率分别为1．1％±2．4％和15．1％±3．5％，两组比较，差异有统计学意义（t=6．598，P〈0．05）。对照组和实验组PANC-1细胞凋亡率分别为7．0％±3．0％和11．4％±2．5％，两组比较，差异无统计学意义（t=1．952，P〉0．05）；对照组和实验组SW1990、ASPC-1、Capan-1、PCT-3、MiaPaCa-2细胞凋亡率分别为1．1％±0．8％、1．5％±0．7％、1．7％±1．2％、1．1％±0．7％、2．2％±1．1％和17．6％±2．2％、46．9％±3．9％、20．0％±2．8％、12．1％±1．6％、31．1％±2．5％，两组比较，差异均有统计学意义（t=12．208，19．846，10．405，10．909，18．327，P〈0．05）。结论成功构建了携带抗EGFR单链抗体基因的rAAV载体，其表达的抗EGFR单链抗体蛋白对人胰腺癌细胞株有明显的抑制作用。
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