作者：李琼书; 成先义; 胡源; 陈洁莹; 巩秀; 肖...乳腺癌plac1tcr肿瘤免疫治疗
摘要：目的研究胎盘特异性基因1（PLAC1）特异性T细胞受体（TCR）基因修饰T细胞对乳腺癌的抗肿瘤作用。方法磁珠分选人类白细胞抗原分型为A2（HLA-A2）的志愿者外周血单个核细胞（PBMC）中的CD8^＋T细胞,流式检测CD8^＋T细胞的表型。通过慢病毒载体构建、包装,将可识别乳腺癌肿瘤抗原PLAC1的HLA-A2限制性的TCR基因导入CD8^＋T细胞（称为TCR-T细胞）,以慢病毒空载体包装、感染的CD8^＋T细胞（NC-T细胞）作为对照细胞,通过流式细胞术检测PLAC1特异性TCR的表达效率。免疫荧光和流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231（三阴性乳腺癌细胞）的PLAC1和HLA-A2血清型的表达。WST-1法检测不同效靶比（5：1、10：1和20：1）TCR-T细胞或NC-T细胞与乳腺癌细胞MCF-7或MDA-MB-231作用后的细胞毒性,并通过ELISA检测共培养后T细胞IFN-γ的释放量。通过裸鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型检测TCR-T细胞以及NC-T细胞的抗肿瘤作用。采用单因素方差分析及独立t检验进行统计学分析。结果磁珠分选出的CD8^＋T细胞CD3^＋CD8^＋比例达到（98.89±0.30）﹪。经慢病毒感染、五聚体检测,TCR-T细胞中PLAC1特异性TCR的正确表达率为（24.58±0.82）﹪,NC-T细胞不表达PLAC1特异性TCR。免疫荧光和流式结果显示乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231为HLA-A2和PLAC1双阳性表达细胞。其中流式检测结果显示,MCF-7和MDA-MB-231细胞中HLA-A2的表达效率分别为（93.04±1.36）﹪和（98.72±0.12）﹪。在效靶比为20：1时,TCR-T细胞对MCF-7杀伤率为（51.5±1.37）﹪,高于NC-T细胞对MCF-7的杀伤率（5.93±2.40）﹪,t=15.507,P〈0.01;TCR-T细胞对MDAMB-231杀伤率为（44.34±2.20）﹪,高于NC-T细胞对MDA-MB-231杀伤率（5.15±2.40）﹪（t=10.694,P〈0.01）。在相同效靶比情况下,TCR-T细胞对MCF-7或MDA-MB-231细胞的细胞毒性高于NC-T细胞,且随着效靶比的增加杀伤效果增强。在效靶比为20：1时,与MCF-7共
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