作者：冉凤英; 陈龙; 张斌强; 尚兵; 余飞; 陈炜...骨髓间充质干细胞外泌体toll样受体信号通路巨噬细胞
摘要：目的探讨Toll样受体（TLR）3和4信号通路激活的间充质干细胞外泌体（MSCs-Exo）对巨噬细胞极化的影响。方法差速贴壁法体外培养大鼠骨髓源MSCs,用外泌体提取试剂盒分别提取MSCs、TLR3信号通路激活的MSCs、TLR4信号通路激活的MSCs培养上清中的外泌体。用含10﹪FBS、10﹪L929条件培养基的RPMI-1640培养得M0型巨噬细胞,实验分6组：对照组及MSCs-Exo、TLR3信号通路激活的MSCs-Exo、TLR4信号通路激活的MSCs-Exo、LPS、IL-4＋IL-13分别与M0型巨噬细胞共培养,48 h后收集各组巨噬细胞光镜下观察形态,流式和qPCR检测免疫表型（CD206、Arg-1、TNF-α、iNOS）及炎症因子（CCL22、IL-1β、IL-6、IL-10）表达的改变。组间比较采用单因素方差分析及独立t检验进行统计学分析。结果 MSCs鉴定符合间充质干细胞特性,MSCs-Exo为双层膜囊泡结构,直径在40~200nm之间,表达外泌体标志性蛋白CD9、HSP70;光镜下观察各组巨噬细胞形态,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞呈长梭形,伪足较多;流式检测发现,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞均高表达CD206（107.2±6.87、102.4±9.83、112.0±9.24 vs 56.0±7.38,F=47.234,P均〈0.001）、Arg-1（135.2±6.87、130.2±7.59、203.4±9.07 vs 117.8±9.12,F=109.827,P=0.009、0.048、0.000）;低表达TNF-α（27.0±5.65、24.6±5.02、25.6±4.15 vs 36.6±7.09,F=4.882,P=0.046、0.015、0.017）,而MSCs-Exo刺激的巨噬细胞低表达i NOS（240.2±8.43 vs 308.8±9.88,P〈0.001）;TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞i NOS表达差异无统计学意义（P〉0.05）。q PCR检测发现,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞均高表达CCL22（2.277±0.744、1.570±0.209、1.642±0.443 vs 1.000±0.111,F=23.654,P=0.015、0.003、0.031）、IL-10（1.233±0.136、2.426±0.343、1.390±0.155 vs 1.000±0.130,F=103.251,P=0.048、0.000、0.008）,低表达I
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