小鼠CD4^＋记忆性T淋巴细胞的产生、纯化、鉴定及皮肤移植的检测

作者：朱鹏; 陈义发; 李丹; 陈孝平记忆t细胞免疫磁性分离流式细胞术酶联免疫斑点技术移植小鼠

摘要：目的建立CD4^＋记忆T细胞（memory T lymphocytes，Tm）的免疫磁珠分离方法，并检测其体外部分功能。方法借助小鼠皮肤移植模型，制备受鼠脾细胞悬液，运用免疫磁珠方法分离CD4^＋Tm，用台盼蓝染色法和流式细胞仪检测分选所得细胞的活性和纯度，并在体外用ELISPOT技术检测其不同抗原刺激时IFN-γ活性分泌频数。结果小鼠皮肤移植皮片平均存活时间为（13．6±0．9）d；分离所得CD4^＋Tm的活细胞百分率为（98．4±0．7）％；流式细胞术检测表型，其中CD4^＋CD8^-细胞比例占（96．06±2．49）％，CD44^＋CD62L^-细胞比例占（94．13±2．36）％，CD4^＋CCR7^-细胞比例占（96．39±1．93）％；在无刺激物作用或者大鼠脾细胞、供体脾细胞、刀豆素A等刺激物作用时，IFN-γ活性分泌频数分别为3±1、6±3、339±14、108±9个／10^4，差异有统计学意义。结论通过小鼠皮肤移植模型及免疫磁性分离技术，可制备高纯度无菌的CD4^＋Tm，其细胞活力不受影响，作用具有良好的供体特异性。这为深入研究Tm在移植物免疫方面的作用提供了技术资料。

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