鸭乙型肝炎病毒cccDNA Taq Man荧光定量PCR的建立

作者：付美丽; 林青; 刘小朋; 施水兰; 陈少华; ...鸭乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸共价闭合环状聚合酶链反应

摘要：目的建立鸭乙型肝炎病毒（DHBV）cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。方法用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接，转染TOP10菌，筛选阳性菌落，提取质粒，制作外标准品；在DHBV基因组负链两侧设计一对引物，并在引物间设计和荧光标记一段TaqMan探针，严格优化反应物的组成和扩增条件，建立了DHBVcccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。结果最低可检出104拷贝／ml；批内误差为0．2％～3．14％，批间误差为2．22％～4．43％；在10^5—10^12拷贝／ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2．8361ln（x）＋41．45，r=-0．9985]。结论该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术。

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