EHEC O157：H7志贺样毒素Ⅱ（Stx2）的克隆表达与活性研究

作者：马颖; 毛旭虎; 邹全明基因克隆原核表达

摘要：目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7志贺样毒素Ⅱ（ShigaliketoxinⅡ,Stx2）,并鉴定其生物学活性.方法 采用PCR法自EHEC O157：H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c（＋）-stx2,经测序鉴定后转化E.col iBL21（DE3）,IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达.以EHEC O157：H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性.结果 扩增的stx2基因约1230bp;原核表达质粒pET-11c（＋）-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21（DE3）中得到表达,蛋白表达率约25%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量（Mr）约72×10^3;重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD50为35 pg/ml;Stx2对小鼠致死剂量LD100为10μg.结论 成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157：H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础.

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