甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白的分离、纯化和鉴定

作者：胡明冬; 徐剑铖; 周长喜; 冯英凯; 龚传明...甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白鉴定aktaexplorer蛋白纯化系统沙门菌鞭毛蛋白蛋白纯化western扫描电子显微镜

摘要：目的提纯甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白并鉴定. 方法选用甲型副伤寒沙门菌,经自制的液体培养基扩大培养后,酸裂解法初步分离出鞭毛蛋白,用AKTA Explorer蛋白纯化系统除盐,弱阴离子交换层析纯化.纯化的蛋白用SDS-PAGE、Western blot和磷钨酸负染扫描电子显微镜(scanning electron microcopy, SEM)观察并摄片鉴定.考马斯亮蓝法测定所获得鞭毛蛋白的产量. 结果 SDS-PAGE提示纯化的鞭毛蛋白为一条相对分子质量(Mr)为52×103蛋白带;免疫印迹试验亦提示条带在Mr 52×103处; SEM观察发现该鞭毛蛋白呈丝状;三者均证实该蛋白为同一均质蛋白.蛋白定量测得每克湿重的细菌可提取(4.8±0.5)mg鞭毛蛋白. 结论经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,且易于纯化和鉴定.

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