HCV核心基因插入突变体编码蛋白对人肝癌细胞系（Huh-7）细胞基因表达的影响

作者：窦骏; 刘蓬勃人肝癌细胞系基因插入编码蛋白突变体affymetrixmicroarray基因表达改变抗凋亡基因prkcz重组表达质粒免疫反应基因抗hcv药物表达上调致癌基因fhl2生物学功能蛋白酶活性

摘要：目的用基因表达分析法鉴定丙型肝炎病毒(HCV)核心(Core, C)区基因插入突变体编码蛋白在人肝癌细胞系(Huh-7)表达,探讨该蛋白生物学功能及其基因表达改变与致病的关系. 方法构建HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白重组表达质粒,建立表达C基因插入突变体编码蛋白Huh-7细胞系,按Affymetrix公司实验程序制备探针、再与该公司HG-U133A和HG-U133B芯片杂交.对基因表达上调或下调≥3倍的基因,用NetAffx作进一步分析.并用半定量RT-PCR对其中3个上调基因进行鉴定. 结果 Microarray分析显示,HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白比C蛋白引起更多的基因表达改变,主要集中在信号传导、蛋白酶活性、分子转运、免疫反应等,特别是免疫反应基因表达更加显著.C基因插入突变体编码蛋白表达可同时导致凋亡基因/抗凋亡基因表达上调或下调及致癌基因上调.半定量RT-PCR对有趣的致癌基因FHL2、抗凋亡基因PRKCZ和凋亡基因LGALS1的鉴定结果表明,FHL2、PRKCZ和LGALS1基因的表达比空载体转染对照组相同基因明显上调. 结论HCV C基因插入突变体编码蛋白在Huh-7细胞表达对其基因表达有很大影响,其中对免疫反应基因的影响更明显,这一结果对理解HCV C基因插入突变体编码蛋白在HCV致病过程中的作用及其研制抗HCV药物均有重大的参考价值.

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