原位PCR检测霍乱弧菌ctxAB基因

作者：朱利; 俞守义; 陈清; 蔡俊鹏霍乱弧菌原位pcr基因霍乱毒素细菌培养ab序列荧光素标记细胞扩增产物

摘要：目的为监测环境中的霍乱弧菌,建立原位PCR(in situ PCR, ISPCR)检测方法. 方法纯培养的霍乱弧菌为实验材料,霍乱毒素基因(ctxAB)为靶序列.4%多聚甲醛固定细胞,1mg/ml溶菌酶消化20 min,PCR反应体系中加入2.5%甘油,以荧光素标记的引物为标示物,在液相环境下,进行靶序列的ISPCR. 结果经蓝光激发,荧光显微镜下有扩增产物的细菌发出明亮的绿色荧光,阴性对照则无荧光. 结论由于ISPCR既能检测靶序列,又保护了细菌形态,可以在检测中省去细菌培养的过程,因此,为快速而准确的检测环境中霍乱弧菌提供了一种新方法.

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