作者：张刚庆; 方驰华; 池达智骨髓间充质干细胞肝细胞生长因子实验研究细胞分化逆转录聚合酶链反应免疫组化染色mscs流式细胞仪检测碱性磷酸酶染色ck18定向诱导分化免疫组化检测成年大鼠sd大鼠分离纯化基因表达
摘要：目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外是否可定向诱导分化为肝细胞及其方法.方法采用梯度离心法,分离纯化SD大鼠的MSCs,流式细胞仪检测和碱性磷酸酶染色鉴定细胞类型.根据培养基中肝细胞生长因子(HGF)浓度不同,将MSCs分为4组进行诱导分化:A组0 ng/ml, B组10 ng/ml,C组20 ng/ml,D组40 ng/ml.倒置显微镜连续观察细胞分化过程的形态学变化.于培养的1,3,7,14,21,28 d,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫组化检测各组细胞甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白的基因和蛋白表达.结果分离纯化的SD大鼠MSCs的表面标志为CD29+,CD44+,CD34-,CD45-和CD90+,细胞的碱性磷酸酶染色阴性,细胞纯度达98%以上.C组与D组的MSCs,于培养第7天出现AFP基因表达,第14天表达增强,第28天表达减弱;第14天始出现白蛋白、CK18基因表达,而后持续.B组和A组在培养过程中,未出现AFP、CK18和白蛋白的表达.C组与D组MSCs的AFP细胞免疫组化染色培养第7天即出现阳性,第14天白蛋白和CK18免疫组化染色阳性.A组和B组的MSCs的AFP、白蛋白和CK18的免疫组化染色均阴性.结论成年大鼠MSCs在较高浓度的HGF的诱导下,可分化为肝细胞.
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