作者：朱易凡; 王深明甲状旁腺激素转染突变型pth293细胞基因pcdna3表达载体原基体细胞
摘要：目的研究对前甲状腺激素原基因进行定点突变,并转染体细胞产生成熟甲状旁腺激素.方法采用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术,自组织基因组基因中扩增前甲状旁腺激素原的cDNA,并将野生型甲状旁腺激素编码第28位的密码子GTT突变为AGA,使N端28-31氨基酸变为Arg-Lys-Lys-Arg,成为furin酶的酶切位点;将获得的突变表达载体pcDNA3.1/mPTH通过脂质体法转染体外培养的293细胞,用放射免疫法测定表达水平.结果成功地获得突变型甲状旁腺激素原cDNA,293细胞转染突变表达载体后,每日培养液中甲状旁腺激素含量达28.34～52.64 pg/2.0×106细胞,远高于空载体转染的细胞培养液.结论利用PCR技术可获得突变型甲状旁腺激素原的cDNA,突变表达载体pcDNA3.1/mPTH能成功转染体细胞并产生甲状旁腺激素.
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