作者：庞伟; 郭振荣; 帅秀蓉; 吕艺; 孙丹; 杨立...烫伤mrna表达休克期切痂大鼠白细胞介素4目的基因提取纯化贴壁法
摘要：目的探讨烫伤大鼠伤后不同时间切痂对Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和Th2细胞因子白细胞介素4(IL-4)循环水平的变化及其mRNA在脾脏T淋巴细胞表达的影响.方法 160只健康雄性Wistar大鼠背部30% Ⅲ°烫伤后,随机分为单纯烫伤对照组和伤后8 h、24 h、96 h切痂组,在伤后4、12、24、48、96、120、168 h活杀动物,采集血液和脾脏标本.ELISA法检测血浆内IFN-γ、IL-4浓度;Ficoll分离液法、贴壁法和尼龙毛柱吸附法提取纯化脾脏T淋巴细胞,一步法提取细胞总RNA、RT-PCR法扩增目的基因、琼脂糖凝胶电泳分析IFN-γ和IL-4 mRNA的表达.结果烫伤4 h大鼠循环内上述细胞因子的浓度大幅升高, 同时其mRNA表达迅速上调.Th1型细胞因子IFN-γ及其mRNA表达在烫伤后24 h达峰值,其后逐渐下降;Th2型细胞因子IL-4的循环浓度及mRNA表达进行性增加;伤后7 d出现明显偏向Th2型反应的现象.切痂组两个细胞因子浓度增加及其mRNA表达上调的变化幅度小于单纯烫伤对照组,其中8 h切痂组的变化最小,24 h和96 h切痂组次之.结论休克期切痂有利于抑制严重烧伤后Th2型细胞因子的过度表达.
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