作者：罗金; 杨菁; 徐望明; 尹太郎真核表达载体避孕疫苗
摘要：目的：构建小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1（Crisp-1）真核表达载体,并观察其在COS-7细胞中的表达。方法：从小鼠附睾组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Crisp-1基因开放阅读框（ORF）,将目的基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,经脂质体介导转染COS-7细胞,并利用间接免疫荧光和RT-PCR检测其在COS-7细胞中的表达。结果：酶切电泳鉴定结果显示Crisp-1基因克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与基因库（GeneBank）中的Crisp-1序列相符。脂质体转染后,间接免疫荧光和RT-PCR结果均表明重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1能在COS-7细胞中表达。结论：成功获得了能在COS-7细胞中表达的小鼠Crisp-1DNA疫苗的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp-1,为后续研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定了基础。
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