作者：石燕; 蒋椒; 沈卫英; 蒋雅红; 申庆祥c3d分子佐剂表达纯化
摘要：目的：在大肠杆菌BL21（DE3）中表达hCGβ-（CTP）4、hCGβ-（CTP）4-（C3d-P28）4融合蛋白，并对蛋白进行分离纯化。方法：将pBSMR-（CTP）4中的（CTP）4基因片断克隆入表达载体pET-28a（＋），得到表达质粒pET-28a（＋）-（CTP）4。将PCR获得的补体C3d-P28DNA序列以头尾串连的方式构建四聚体。将（C3d-P28）4基因片断克隆入pBSMR-（CTP）4，得到pBSMR-（CTP）4-（C3d-P28）4，进一步得到表达质粒pET-28a（＋）-（CTP）4-（C3d-P28）4。将表达质粒pET-28a（＋）-（CTP）4和pET-28a（＋）-（CTP）4-（C3d-P28）4分别转化入大肠杆菌BL21（DE3），表达融合蛋白hCGβ-（CTP）4和hCGGβ-（CTP）4-（C3d-P28）4。采用Ni-NTA-resin和凝胶过滤方法纯化蛋白。结果：菌株经IPTG诱导后检测到目的基因的表达产物，SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白的分子量分别为27kD和40kD左右。结论：在BL21（DE3）中成功表达了hcGD-（CTP）4和hCGDGβ-（CTP）4-（C3d-P28）4融合蛋白，并确立了纯化方法，为进-步研究其免疫原性和应用于抗肿瘤疫苗奠定了基础。
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