作者：冯秀艳; 张志刚; 赵仲华; 陈琦; 郭慕依饰胶蛋白聚糖受体表达western印迹法大鼠dcn基因转染mrna表达肾小球硬化蛋白表达脂质体介导法msc免疫荧光法时间依赖性对照组外源性系膜细胞基因转录
摘要：目的探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)拮抗肾小球硬化进展的作用是否与其抑制系膜细胞(MsC)转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体(TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡ)表达有关.方法经外源性TGF-β1刺激培养的大鼠肾MsC,采用RT-PCR、Western印迹法检测其TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡ的表达.用脂质体介导法将DCN基因转染MsC,经筛选和鉴定,用RT-PCR、Western印迹法和免疫荧光法分别观察DCN基因转染对TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡ表达的影响.结果经外源性TGF-β1刺激的正常MsC,其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ基因转录及蛋白表达均明显升高,且呈时间依赖性,于作用24 h达高峰.与转染空载体的MsC(1P-1)相比,转染DCN基因的MsC克隆(3D-5,7D-1)的TGF-βR Ⅰ mRNA表达分别为对照组的20%和32%,TGF-βRⅡmRNA表达分别为对照组的64%和59%;TGF-βR Ⅰ蛋白表达分别为对照组的34%和25%,TGF-βRⅡ蛋白表达分别为对照组的49%和57%.同时转染DCN基因也能阻止MsC对外源性TGF-βl刺激所致的两种受体表达升高作用.结论过表达DCN基因的MsC,其TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡmRNA和蛋白表达水平均明显降低,这可能是DCN拮抗由TGF-β介导的肾小球硬化发生的重要机制之一.
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