作者：管娜; 丁洁; 张敬京; 杨霁云嘌呤霉素大鼠肾小球nephrinpodocin蛋白尿间接免疫荧光法定量pcr肾病综合征
摘要：目的动态观察肾小球足细胞及裂孔隔膜分子nephrin,podocin和α-actinin在嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)大鼠肾病模型肾组织中表达的时相变化,探讨这些分子间及这些分子与蛋白尿发生的关系.方法用间接免疫荧光染色及实时定量PCR方法,检测PAN注射后12 h、1 d、36 h、2 d、5 d、10 d、15 d及20 d大鼠肾小球中nephrin,podocin和α-actinin分子分布和表达.结果(1)PAN注射后1 d、2 d及5 d时,尿蛋白量无明显改变;10 d时尿蛋白量明显增加(P=0.02);20 d时恢复至对照组水平.(2)对照组大鼠肾小球中nephrin和podocin沿肾小球毛细血管袢呈连续线状分布,α-actinin沿肾小球毛细血管袢呈点线状分布.PAN注射1 d后,nephrin和podocin的分布即发生改变,表现为断续、非线性分布.nephrin和podocin的分布改变随着尿蛋白的增多而加重,尿蛋白恢复时也逐渐恢复.20 d时,α-actinin沿肾小球毛细血管袢呈连续线性分布.(3)免疫荧光定量分析结果表明,在PAN注射后36 h(P=0.04)、2 d(P=0.03)及5 d(P=0.04)时,肾小球中podocin的免疫荧光染色强度明显下降,于第10 d降至最低(P=0.006);自15 d时逐渐恢复(P=0.007),20 d后podocin的免疫荧光强度恢复至对照组水平.nephrin的免疫荧光染色强度在PAN注射第5天后出现下降(P=0.002),持续下降至第10天(P=0.007),于第15天开始恢复(P=0.04),但第20天时仍低于对照组(P=0.02).α-actinin的免疫荧光染色强度(P=0.009)及分布面积在PAN注射第20天时出现增高.(4)实时定量PCR结果表明,PAN注射后5 d时,肾皮质中nephrin mRNA水平显著下降(P=0.02),podocin mRNA水平呈下降趋势,10 d时恢复至对照组水平.结论nephrin和podocin在肾小球分布及表达量的改变早于蛋白尿的发生.nephrin和podocin的分布改变先于其蛋白水平及mRNA水平的减少,可能是蛋白尿发生的始动因素.在蛋白尿发生发展过程中肾小球中podocin蛋白水平下降及恢复均先于nephrin.尿蛋白量与肾小球中
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