作者:唐皖; 罗光华; 姚霜; 王敏; 潘丽莉; 喻妙...载脂蛋白m炎症反应视网膜血管内皮细胞人单核细胞趋化
摘要:目的观察高糖培养环境下人视网膜血管内皮细胞(HRECs)中载脂蛋白M(ApoM)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的变化,探讨ApoM过表达对高糖诱导的HRECs中TNF-α和MCP-1表达的抑制作用。方法采用含体积分数10%胎牛血清(FBS)和5.5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基培养HRECs后分为6个组。正常对照组细胞进行常规培养,高糖组细胞用含30 mmol/L D-葡萄糖的高糖培养基进行培养,ApoM过表达组用载有ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞,空载组用无ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞,空载+高糖组用高糖培养基培养空载体感染的细胞,ApoM过表达+高糖组用高糖培养基培养ApoM感染的细胞。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测细胞中ApoM蛋白相对表达量。结果实时荧光定量PCR法检测显示,高糖组细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=5.517、3.295、2.555,均P〈0.05)。HRECs感染慢病毒后生长良好,ApoM过表达组细胞中ApoM mRNA相对表达量为236.400±39.270,明显高于空载组的1.000±0.153,差异有统计学意义(t=5.995,P〈0.01),空载组细胞中未见ApoM蛋白表达条带,ApoM过表达组蛋白表达条带较强。正常培养基和高糖培养基培养后24 h,ApoM过表达组中ApoM蛋白相对表达量分别为1.000±0.249和2.978±0.285,差异有统计学意义(t=5.056,P〈0.01)。空载组、空载+高糖组、ApoM过表达组、ApoM过表达+高糖组细胞中TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量的总体比较差异均有统计学意义(F=5.966,P=0.026;F=14.410,P=0.002),ApoM过表达+高糖组细胞中TNF-α mRNA和MCP-1 mRNA相对表达量明显低于空载+高糖组,差异均有统计学意义(P=0.017、0.004)。 结论高糖培养�
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