作者：贾育蓉; 杨伟; 张红; 张琰; 孙靖肿瘤抑素血管生成抑制因子血管内皮细胞增生迁移管腔形成人
摘要：背景肿瘤抑素是迄今发现活性最强的内源性血管生成抑制因子，对病理性新生血管形成有明显抑制作用。Tum5片段为肿瘤抑素的抗血管生成活性片断。目的研究腺病毒介导的Tum5重组基因过表达对生理状态下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增生、迁移及管腔形成的影响。方法构建表达绿色荧光蛋白的空载体腺病毒（rAd—GFP）和携带重组几m5基因的腺病毒载体（rAd—Tum5）。将HUVECs分为正常对照组、空载体组（rAd-GFP组）和Tum5基因组（rAd-GFP—Tum5组）。将rAd—GFP和rAd—Tum5病毒颗粒（1×10^10／m1）各20μl分别加入rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组培养液以感染培养的细胞48h，倒置荧光显微镜下观察各组细胞中GFP的表达，并计算病毒的感染效率；采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测各组细胞在波长为450nm处的吸光度（A）值并计算细胞增生率；采用Transwell小室实验测定各组的迁移细胞数目；采用基质胶（Matrigel）实验检测各组细胞的管腔形成数；采用人血管内皮生长因子（VEGF）ELISA试剂盒检测细胞感染后24、48和72h各组细胞培养上清液中VEGF质量浓度。结果倒置荧光显微镜下可见rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组HUVECs中呈绿色荧光，rAd—GFP组和tad—GFP—Tum5组的感染效率分别为55．13％和50．31％。细胞感染后24h和48h，正常对照组、rAd—GFP组和rAd-GFP—Tum5组细胞增生率比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）；细胞感染后72h，rAd-GFP—Tum5组细胞增生率明显低于正常对照组和rAd—GFP组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。细胞感染后48h，正常对照组、rAd—GFP组和rAd—GFP—Tum5组迁移细胞数分别为（2260．25±930．44）、（2370．00±441．06）和（723．75±363．80）个，总体比较差异有统计学意义（F=8．524，P=0．008），rAd—GFP—Tum5组迁移细胞数量较正常对照组和rAd—GFP组均明显减少，差异�
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