作者：杨宝霞; 王晔; 赵晓雯; 刘廷; 黄钰森晶状体上皮细胞后发性白内障晶状体囊细胞培养人囊袋模型
摘要：背景上皮一间质转化（EMT）是导致后囊膜混浊（PCO）的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中LECsEMT的发生情况。方法利用健康供体的40只尸眼行体外模拟的白内障摘出术，游离晶状体囊袋后用昆虫针固定于培养皿，置于含体积分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养液中培养4周，分别于培养后0、3、7、14和28d在光学显微镜下观察培养囊袋中LECs的生长情况；收集0、3、7和28d的囊袋组织制备组织病理学切片，采用苏木精一伊红染色法检测囊袋上LECs的细胞形态；采用免疫组织化学染色法检测EMT标志物OL—SMA、E—cadherin和Vimentin蛋白在囊袋上LECs中的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测不同时间点囊袋上LECs中a-SMA、E—cadherin和VimentinmRNA及其蛋白的表达变化。结果未进行培养的囊袋后囊膜上未发现LECs生长，囊袋培养后3d可见后囊膜周边出现LECs并逐渐向中央区增生，培养后7dLECs完全覆盖后囊膜，略呈铺路石样外观并出现皱褶，此后随着培养时间的延长皱褶的数量增多并伸长，囊袋张力增强。免疫组织化学染色结果显示，随培养时间的延长，囊袋上LECs中E—cadherin的表达强度逐渐下降，而a-SMA和Vimentin的表达强度逐渐增强。实时荧光定量PCR检测表明，培养后0、3、7、14和28d囊袋上LECs中E—cadherinmRNA的相对表达量分别为3．35±0．13、1．47±0．20、1．13±0．14、1．00±0．85和0．23±0．03，VimentinmRNA的相对表达量分别为1．00±0．73、1．05±0．14、2．24±0．43、2．84±0．34和8．570±0．40，d—SMAmRNA的相对表达量分别为1．00±0．06、2．68±0．28、4．24±0．05、2．05±0．90和15．30±0．19，总体比较差异均有统计学意义（E—c
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