作者：孟倩丽; 杨培增; 郭海科; 崔颖树突状细胞巨噬细胞抗原递呈表型特征葡萄膜组织分布荧光抗体技术激光扫描共焦显微镜
摘要：背景 以往对组织中抗原递呈细胞（APCs）的研究多采用体外免疫组织化学的方法,其结果易受到多种因素的影响,曾有研究者采用前房注射荧光素标记抗体的方法对眼前节组织中的APCs进行研究,但易损伤角膜等组织.采用活体标记的方法探讨虹膜和睫状体中APCs的表型特征,对进一步阐明APCs在维持眼部免疫平衡状态中的作用及机制具有重要意义. 目的 探讨正常小鼠虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点.方法 6～8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠51只按照随机数字表法分为17个组,在生物解剖显微镜下用玻璃微量注射针于角巩膜缘后0.5 mm处刺入玻璃体腔内注射2.0 μl AlexaFluor594或Alexa Fluor 488标记的卵清蛋白（OVA）、抗CD11c、主要组织相容性复合体分子Ⅱ（MHC-Ⅱ）、F4/80、B7-1和B7-2单克隆抗体或其两两抗体的混合液,注射24 h后取小鼠虹膜组织,结合平片技术和激光扫描共焦显微镜观察虹膜中APCs的表型特征、分布及形态学特点,并用体外染色实验验证体内染色结果. 结果 正常小鼠虹膜中存在大量呈规则网络状分布的OVA^＋、F4/80^＋、CD11c^＋、MHC-Ⅱ^＋、B7-1^＋和B7-2^＋细胞,Alexa Fluor 594标记的阳性细胞呈红色荧光,Alexa Fluor 488标记的阳性细胞呈绿色荧光.双重染色实验结果可见,虹膜中约有90％的F4/80^＋细胞为OVA^＋,约有60％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞表达MHC-Ⅱ,约有35％的F4/80^＋细胞和CD11c^＋细胞同时表达B7-1和B7-2,70％以上的OVA^＋细胞为MHC-Ⅱ^＋.根据标记细胞的形态不同可分为树突状细胞（DC）和多形性细胞两大类.结论 活体玻璃体腔内注射荧光素标记抗体的方法可以准确观察正常小鼠虹膜中的APCs.虹膜中APCs的表型特征、分布和形态学特点与眼免疫偏离和炎症密切相关.
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