作者：张小猛; 徐春玲; 庞利民; 高野雅彦视网膜神经节细胞组织培养三维培养bdnfgdnf
摘要：目的建立成熟视网膜神经节细胞(RGCs)的体外三维培养模型,并应用此方法研究BDNF/GDNF对体外三维培养的成熟RGCs轴突再生的促进作用.方法取10周龄大鼠,每只鼠眼视网膜切成0.5 mm×0.5 mm大小16片.将视网膜片神经纤维层向下浸入12孔培养板的胶原溶液层中,胶原溶液凝固后,培养孔内加入无血清MEM培养液.实验组另外分别添加BDNF/GDNF 100 ng/ml.相差显微镜观察生长情况,记数每片视网膜外生神经突起数.应用羊抗鼠FITC-Thy-1.1单克隆抗体鉴定培养的神经节细胞突起.结果RGCs突起在凝胶中呈螺旋迂曲生长,无神经因子可存活2周以上,加入神经因子可存活3～4周.培养6 d后计数每片视网膜外生神经突起数,BDNF对照组和实验组分别为24.4±11.7和51.2±15.6.GDNF对照组和实验组分别为19.9±11.6和33.6±18.5.免疫组织化学荧光显色神经节细胞突起呈阳性反应.结论应用凝胶做支持物可以成功地对成熟RGCs进行三维培养,BDNF/GDNF可以明显地促进神经节细胞的神经突起再生.
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