作者：李立梅; 刘戈飞; 张劲松晶状体上皮细胞活性氧凋亡转过氧化氢酶lecs氧化损伤耐受性白内障
摘要：目的探讨转过氧化氢酶(CAT)基因晶状体上皮细胞(LECs)对氧化损伤耐受性的变化,为白内障的临床预防与治疗提供实验依据.方法应用稳定转染的方法构建CAT基因高表达LECs SRA01/04-CAT,测定CAT的活性.以SRA01/04和SRA01/04-CAT细胞为研究对象,使用过氧化氢(H2O2)为处理因素,MTT方法测定对SRA01/04和SRA01/04-CAT细胞的半数致死量(IC50);Annexin V和碘化丙啶双染色分析H2O2诱导LECs凋亡作用.Western印迹方法分析凋亡过程中caspase-3的活化.结果成功构建CAT基因表达水平提高的SRA01/04-CAT细胞.SRA01/04-CAT细胞CAT的表达水平是SRA01/04细胞的3.5倍,SRA01/04-CAT细胞的CAT活性是SRA01/04细胞CAT活性的2.2倍.H2O2对SRA01/04细胞的IC50为32.24μmmol/L,对SRA01/04-CAT的IC50为85.32μmmol/L,转染CAT基因后SRA01/04-CAT对过氧化氢的耐受能力是SRA01/04的2.65倍.相同培养条件下H2O2诱导SRA01/04细胞凋亡率是SRA01/04-CAT细胞的2.1倍.H2O2诱导LECs凋亡的过程伴随caspase-3的激活,SRA01/04-CAT细胞caspase-3活化的时间比SRA01/04细胞晚,同一时刻上SRA01/04-CAT细胞caspase-3活化的强度比SRA01/04细胞弱.结论CAT基因可提高LECs对氧化损伤的耐受性,能够抑制活性氧诱导产生的细胞凋亡效应.CAT基因可能是一个较好的候选基因,用于白内障基因治疗.
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