作者：胡东亮; 欧阳金芝; 王保军; 马鑫; 李宏召...类固醇生成因子h295r细胞醛固酮合成酶
摘要：目的 观察血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后醛固酮合成酶（CYP11B2）mRNA及醛固酮激素的改变,探讨类固醇生成因子-1（SF-1）基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用携带U6启动子和SF-1特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil1-SF-1-shRNA及含非特异性shRNA编码序列的阴性对照质粒pGenesill-negative-shRNA转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测SF-1表达的改变,以100 nmol/L浓度ATⅡ刺激实验组和对照组细胞,检测ATⅡ刺激后3、6、9、12、15、18 h时间点CYP11B2 mRNA表达水平,与未刺激时对比,检测两组细胞CYP11B2 mRNA的最大增幅.用放射免疫法测定醛固酮激素在ATⅡ刺激24 h后的分泌水平,对比两组细胞醛固酮增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69.07%和71.20%（P＜0.01）.ATⅡ刺激后12 h时CYP11B2 mRNA表达水平最高,与未刺激前比较,实验组和对照组的CYP11B2 mRNA增幅分别是50.21倍和800.09倍（P＜0.01）,后者是前者的15.93倍（P＜0.01）.同样,ATⅡ刺激后醛固酮激素分泌水平均升高,对照组细胞刺激前后分别为（0.061±0.007）μg/L和（0.256±0.014）μg/L（P＜0.01） 而实验组醛固酮激素在ATⅡ刺激前后则分别为（0.101±0.010）μg/L和（0.252±0.016）μg/L（P＜0.01）,两组比较,前者增幅高于后者1.7倍（P＜0.01）.结论 SF-1表达下调可以降低CYP11B2 mRNA及醛固酮对ATⅡ的敏感性和反应性.
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