作者：杨卫忠; 陈春美; 王春华; 石松生; 黄勇; ...缺氧一氧化氮合酶脱噬作用重组腺相关病毒载体
摘要：目的探讨2种分别携带神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）反义RNA重组腺相关病毒载体（rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS）提高PC12细胞耐氧能力和抑制PC12细胞凋亡的作用机制。方法将PC12细胞培养基换成分别含有rAAV—AsnNOS、rAAV-Asi—NOS和rAAV-LacZ（携带β-半乳糖苷酶的结构基因重组腺相关病毒载体）的10％胎牛血清DMEM，设立对照组，测定不同rAAV转染后PCI2细胞在不同缺氧时间下细胞生长趋势和乳酸脱氢酶（LDH）活性改变，流式细胞仪（FCM）测定细胞凋亡率，FCM和半定量RT—PCR分别分析nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA的表达。结果一定感染复数的rAAV对PC12细胞生长趋势无明显影响；转染rAAV-AsnNOS的PC12细胞在缺氧1—6h时LDH活性、细胞凋亡率以及nNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量均较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组均降低；转染rAAV—AsiNOS的PC12细胞在缺氧6～24h时LDH活性、细胞凋亡率以及iNOS、p38MAPK和Caspase-3阳性细胞百分比和mRNA表达量也均较对照组、rAAV—LacZ组和rAAV-AsnNOS组降低。结论在体外神经细胞缺氧模型中，转染后PC12细胞能够耐受缺氧损伤；转染rAAV-AsnNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧早期抑制nNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达，转染rAAV-AsiNOS病毒载体的PC12细胞能够在缺氧晚期抑制iNOS、p38MAPK和Caspase-3的表达。
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