作者：郑骏年; 马腾骧; 孙晓青; 陈家存; 温儒民...sirna表达质粒功能研究western鉴定blot检测癌基因治疗dna序列增殖基因阻抑作用肾癌细胞方法设计重组质粒mrna蛋白表达抑制
摘要：目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径.方法设计有小发夹机构的2条Ki-67 siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer 3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-Ki-67.将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786-0细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Ki-67表达.结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功.其可显著抑制786-0细胞Ki-67 mRNA、 Ki-67蛋白表达.结论成功构建的Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达.
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