作者：高明勇; 郑启新; 肖建德; 李振宇; 郭晓东...胶质细胞源性神经营养因子神经干细胞实验研究基因转染大鼠胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学染色gdnfnestin真核表达质粒神经胶质细胞细胞体外培养中枢神经系统稳定表达生物学特点转基因治疗基因工程构建表达分离纯化
摘要：目的构建表达外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脊髓源基因工程神经干细胞.方法体外分离纯化,扩增大鼠脊髓源神经干细胞,培养、诱导分化结果采用Nestin、NF-200、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学鉴定;用自行构建的大鼠胶质细胞源性神经营养因子真核表达质粒转染神经干细胞,用荧光检测及GDNF免疫组织化学染色予以证实,转基因GDNF表达采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量分析.结果体外纯化获得大量脊髓源神经干细胞,在血清诱导下能分化为神经元和神经胶质细胞;转基因神经干细胞能稳定表达GDNF,在随后3周内,转基因神经球能持续表达外源性GDNF蛋白,表达量稳定在(93.0±6.5)ng/L左右.结论 胚胎脊髓源神经干细胞体外培养能保持干细胞生物学特点,转染GDNF后神经干细胞能稳定表达外源GDNF蛋白,为后续转基因治疗中枢神经系统疾病研究奠定了基础.
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