作者：张文华; 王晓民; 吴承远d细胞gdnf胶质细胞源性神经营养因子酪氨酸羟化酶hva对照组pd工程细胞单基因
摘要：目的建立一种可同时高效稳定表达酪氨酸羟化酶(TH)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的双基因工程细胞,探讨其在帕金森病(PD)基因治疗中的作用.方法应用分子克隆技术构建真核表达载体PcDNA3.1/hGDNF和PcDNA3.0/hTH,并同时转染至SH-SY5Y细胞系,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定筛选出的阳性细胞克隆TH和GDNF的表达水平,将双转工程细胞与MN9D细胞共培养,高效液相色谱分析工程细胞对MN9D细胞生长状态及细胞内单胺类递质含量的影响.结果双转基因工程细胞可防止MN9D细胞退变死亡,与对照组相比较,DA、HVA和DOPAC提高了1.9、2.1和1.7倍(P＜0.01).双转基因工程细胞可对抗MPP+对MN9D的毒性损伤作用,与对照组相比较,DA、HVA和DOPAC提高了3.3、1.7和2.0倍(P＜0.01),而且其效果明显优于TH单基因工程细胞.结论成功构建可分泌人TH和GDNF的双转基因工程细胞,其对多巴胺能神经元具有明显的保护作用,其在PD基因治疗中可能具有防治兼顾作用.
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