SARS病毒S蛋白片段与细胞结合作用分析

作者：魏海燕; 王健伟; 欧阳晶; 王彦斌; 屈建国...严重急性呼吸综合征冠状病毒科蛋白质s受体抗原

摘要：目的研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)S蛋白片段与SARS-CoV敏感细胞Vero的相互作用,明确S蛋白的受体结合位点.方法在E.coli中表达S蛋白第260～600位氨基酸(S260-600)和397～796位氨基酸(S397-796)片段,通过Western blot对蛋白表达进行确认,用Ni-Sepharose螯合层析对重组蛋白进行纯化.将纯化的S260-600和S397-796蛋白与Vero细胞4℃共同孵育1 h后,先后与SARS患者血清及FITC标记的抗人IgG作用,通过流式细胞仪检测蛋白与细胞表面受体的结合情况.结果成功构建了原核表达质粒pET30a/S260-600和pET30a/S397-796,并表达、纯化出S260-600和S397-796重组蛋白.分别用SARS患者血清和抗6×His单克隆抗体进行Western blot检测,证实重组蛋白得到正确表达.流式细胞仪分析显示S260-600和S397-796重组蛋白均可与Vero细胞发生结合,但S397-796的结合力要弱于S260-600.同时发现S260-600重组蛋白与SARS-CoV非敏感细胞NIH 3T3细胞不能结合,进一步证明S260-600重组蛋白与Vero细胞表面受体的结合是特异性的.结论重组蛋白S397-796和S260-600具有受体结合能力,尤其S260-600包含了重要的受体结合位点,对进一步研究介导SARS-CoV感染的细胞表面受体、开展疫苗和抗病毒药物的筛选均具有重要意义.

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