HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定

作者：郝彦玲; 马民强; 傅晶晶; 李海山; 王贻杰...gag蛋白中国株鉴定hiv蛋白亚单位疫苗sepharose毕赤酵母表达系统抗原抗体结合反应抗原检测试剂盒高效表达酵母表达载体阳性血清gag基因pcr扩增gs115免疫学性质纯化工艺deae工程菌株菌体密度蛋白纯度

摘要：目的利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺.方法PCR扩增CN54 Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1.0,电转化毕赤酵母菌株GS115,G418筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SP Sepharose FF和DEAE Separose FF柱层析,用HIV-1阳性血清和p24抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定.结果构建了高效表达CN54 Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A600值)超过300,Gag蛋白表达量达到120 mg/L.纯化后的Gag蛋白纯度高于90%,p24检测强阳性并能够与HIV-1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应.结论本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础.

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