HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

作者：侯俊; 貌盼勇; 洪世雯; 胡燕; 杨健洋; 沈...hiv核心抗原高效表达纯化特异性活性原核系统表达载体酶切外源基因表达

摘要：目的在原核表达系统中对HIV p24抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性.方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(B2N)中扩增p24抗原基因,并克隆入T载体中.通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导,表达p24抗原.利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白.并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、Western Blot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测.结果PCR产物约为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.重组质粒T-p24和pRSET-p24经BamH I和HindⅢ双酶切,其插入的外源基因片段均为690 bp.将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约24×103的外源基因表达带,与计算的相对分子质量相符.经WB和ELISA试验,证明基因工程表达的p24抗原具有较高的特异性及活性.结论成功构建了HIV p24表达载体pRSET-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的特异性及活性.

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社