聚合酶链反应检测致瘤性人类疱疹病毒6型方法的建立及应用

作者：董学君; 施长根; 瞿史文; 刘忠民; 傅佳萍致瘤性人类疱疹病毒6型阳性重组质粒聚合酶链反应检测临床标本果重特异性引物稀释

摘要：目的建立致瘤性人类疱疹病毒6型(HHV 6)荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法,为快速、准确地定量检测HHV 6奠定基础.方法根据HHV 6型基因序列,设计并合成引物、荧光标记探针.先用特异性引物筛选HHV 6,其PCR片段克隆入载体,再对重组质粒进行筛选、测序及鉴定.确证后的HHV 6 DN段制成标准品并作为阳性模板,开发HHV 6 FQ-PCR检测系统.用该系统测定研究样品.结果重组质粒获得的HHV 6 DNA产物经1:10梯度稀释后,制作定量曲线的循环阈值(Ct)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.99.经本反应系统检测的临床标本共135份,检测到16份HHV 6 DNA阳性.结论建立了检测致瘤性HHV 6的FQ-PCR方法;此方法较定性PCR技术更为简便、快速、准确,且具有很好的应用前景和推广价值.

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