柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立

作者：陈洪; 刘晶星; 陈淑云; 何平; 胡宝瑜; 李...vp1小鼠腹腔巨噬细胞柯萨奇b组病毒hela细胞抗原质粒共转染胞质种质表达量

摘要：目的利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量,提高基因疫苗的免疫效果.方法(1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒(EMCV)5'非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7 EMCVP1.将该质粒和编码T7 RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞;(2)将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞.结果(1)经共转染,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1增加2～4倍;(2)两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达.结论pT7 EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达,且表达量比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1明显增加.

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