甲肝减毒活疫苗L-A-1疫苗株的核酸序列测定与比较分析

作者：姜春来; 王鹏富; 刘景晔; 张华远; 万宗举甲肝减毒活疫苗核苷酸甲肝病毒细胞疫苗株适应核酸序列产物纯化同源性氨基酸

摘要：目的测定甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗龙甲-1株(L-A-1)核酸序列,了解其减毒和适应二倍体细胞的分子机制,并与其他甲肝病毒株进行比较,得出L-A-1株的一些特点.方法通过抗原捕获聚合酶链反应(AC-PCR)扩增甲肝病毒减毒活疫苗L-A-1株23代的片段,产物纯化后克隆至T载体并进行序列测定,应用生物信息学软件分析比较.结果得到了甲肝减毒活疫苗L-A-1株的基因序列(nt 25～7 418).L-A-1株开放读码框架(ORF)长6 675个核苷酸,编码2 225个氨基酸.比较分析表明,该株与国际代表株MBB株和HM 175野毒株在核苷酸水平上同源性分别为98.00％和94.00％,在氨基酸水平上同源性分别为98.51％和98.65％.通过与其他细胞适应株、细胞病变株以及减毒株的比较得出:A-1株5′非编码区(5′NTR)nt 152、591、646、687处的突变和180～181处插入11个核苷酸以及2B区的nt3 889(aa1 052-Val)处的突变是病毒适应宿主细胞的分子基础;2C区的nt 4 185(aa1 152-Lys)处的突变可能参与病毒的减毒过程;由于3A区缺失6个核苷酸(nt 5 020～5 025)从而导致两个氨基酸(Asn、Asp)缺失是病毒适应细胞快速增殖的分子基础.结论分析了L-A-1株的基因序列,得出其适应细胞和减毒的核苷酸位点.

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