乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变株复制质粒的构建

作者：王燕; 蒋栋; 魏来; 陈红松; 丛旭; 费然; ...前c区hbvdna质粒培养上清乙型肝炎病毒肝癌细胞株突变株限制性酶切定点诱变基因复制

摘要：目的构建乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本核心启动子区(BCP)突变株的复制质粒. 方法以含1.2倍拷贝HBV DNA全基因的质粒(pHBV1.2)为工具,采用分子克隆、PCR定点诱变、限制性酶切长度多态性和序列分析等技术构建目的质粒.转染肝癌细胞株Huh7后,测定培养上清HBsAg、HBV DNA来了解病毒抗原的表达和病毒复制. 结果成功构建了10种HBV全基因前C区/BCP区突变的表达质粒,转染肝癌细胞株,获得病毒的表达和病毒颗粒的分泌.其中,pUC-HBV T1762、A1764双突变以及pUC-HBV T1753突变株复制效率较高,转染细胞培养上清的HBV DNA为3.16×105拷贝/ml.野生型复制子培养上清HBV DNA含量稍低于BCP突变复制子.结论获得10株含有不同前C区和BCP区突变的HBV全基因复制质粒,为体外进一步研究上述变异的生物学意义提供基本模型.

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