重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究

作者：应革; 吴淑华; 王静; 赵小东; 陈建明; 张...重组巴氏毕赤酵母高密度发酵人乳铁蛋白基因表达发酵参数

摘要：目的在保持生物学活性的前提下,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达.方法从人外周血中分离中性粒细胞,提取总RNA,RT-PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3.5 K上并转化酵母宿主KM71,双层滤膜法筛选高表达株进行补料分批发酵,对发酵产物的理化及生物学活性进行初步检测.结果筛选到一株人乳铁蛋白表达量较高的重组巴氏毕赤酵母p3.5-k-7并对其进行了补料分批发酵.整个发酵历时约9 d,菌浓吸光度A600值最高达到260以上,重组人乳铁蛋白最高表达量为115 mg/L,是摇瓶培养条件下的7.67倍.结论成功实现了人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达,并对发酵参数的优化进行了初步探索.

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