作者：宋艳玲; 沈拓; 朱峰; 张盈帆; 苏志达; 江...成体干细胞基因小鼠施万细胞基因转染周围神经损伤
摘要：目的将构建的Neu基因调节素-1（NRG-1）Ⅲ型感觉运动衍生因子（SMDF）真核表达载体转染肌源性干细胞（MDSC）,通过与施万细胞（Schwann cell,SC）共培养液的方法,诱导转染后的MDSC分化为类SC,证实SMDF基因可促进类SC的增殖、分化,进一步验证SMDF蛋白的功能,为研究周围神经损伤后SC髓鞘化过程及分子机制奠定了实验基础。方法 （1）通过蛋白质印迹法分析小鼠脑、脊髓、背根神经节（DRG）、骨骼肌、肝脏、脾脏等组织中SMDF蛋白的表达情况,同时通过免疫组织化学染色法鉴定SMDF在DRG中的表达;（2）PCR获得小鼠SMDF基因编码区全序列,构建重组真核表达载体p EGFP-N2-SMDF;（3）应用脂质体介导的方法将真核表达载体p EGFP-N2-SMDF和空质粒p EGFP-N2转染体外培养液的MDSC,分为重组质粒组、质粒组和未转染组,检测转染前后SMDF基因和蛋白的表达情况;（4）采用细胞条件培液诱导转染SMDF基因的MDSC分化为施万样细胞,并采用免疫细胞化学方法进行鉴定。数据比较采用one-way ANOVA和t检验。结果 （1）p EGFP-N2-SMDF真核表达载体转染MDSC后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达。（2）PCR和蛋白质印迹法结果显示,重组载体p EGFP-N2-SMDF转染后的细胞中SMDF mRNA水平和蛋白水平的表达明显增高。重组质粒组SMDF/GAPDH值为1.7321±0.1346,分别与空质粒组（0.5975±0.0084）和未转染质粒组（0.4816±0.0092）比较,差异均有统计学意义（t=4.1258、4.3314,P值均小于0.01）。（3）转染SMDF基因的MDSC,经SC条件培液诱导后S-100β的阳性率明显增高。结论实验证明SMDF蛋白可在MDSC中表达,p EGFP-N2-SMDF转染后的细胞中SMDF mRNA水平和蛋白水平的表达明显提高,SMDF基因可促进施万样细胞的增殖、分化。
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