针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究

作者：程光; 章翔; 鲍炜; 张赟; 张新海; 曹卫东...rna干涉小干涉rnapsuper神经胶质瘤

摘要：目的 构建抑制黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）的siRNA表达载体，鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用。方法 化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链，克隆到经Bgl Ⅱ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上，重组构建RNA干涉（RNAi）质粒载体。利用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）、流式细胞术和荧光显微镜，检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达，以了解siRNA的干扰效果。结果 重组构建的pSUPER．MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析，表明寡核苷酸链成功插入到预计位点，并且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测，2对siRNA均有较明显的干涉作用。结论 成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体，抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达。

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