作者：孙鹏; 邹春林; 董恺; 张愚细胞体外培养神经干细胞人胚胎海马免疫细胞化学法体外长期培养无血清培养法细胞有丝分裂细胞倍增时间nestin少突胶质细胞分化能力增殖能力分离培养细胞共培养分裂增生brdu细胞贴壁
摘要：目的研究人胚胎海马神经干细胞体外长期培养的条件和其在自主分化条件下的分化能力和分化特点.方法从人胚胎海马分离神经干细胞.采用无血清培养法,进行体外培养、扩增,形成神经球.使神经球贴壁分化,分化培养基不含有任何细胞有丝分裂促进剂.使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记分裂增生的细胞,观察细胞的分裂增殖情况.使用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞及其在不加诱导剂下的自主分化能力.结果从人胚胎海马分离的神经干细胞具有增殖能力,细胞倍增时间为3.2d.BrdU检测有正在分裂、增殖的细胞.细胞贴壁分化后可以出现Nestin、GFAP、Tuj-1表达阳性的细胞.神经干细胞共培养6个月,传代14代.结论分离培养的海马神经干细胞具有自我更新和增殖能力,可以长期培养.在不加任何诱导剂的自主分化条件下可以向神经元、胶质细胞分化.少突胶质细胞的培养需要不同的培养条件.分离培养的干细胞具有神经干细胞的特征.可用于基础和临床的相关研究.
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