作者：赵丹丹; 孙玉英; 刘楠; 梁飞; 金荔; 奚永...临床应用研究构象分析策略参照链介导聚合酶链反应技术造血干细胞移植序列特异性引物外周血dna等位基因分型结果结果不一致pcr扩增基因型别分辨率高变异基因重复性标本鉴定测序
摘要：目的建立并稳定HLA-B位点的参照链介导的构象分析(RSCA)系统,并鉴定RSCA分型策略的优势.方法提取27例造血干细胞移植患者及63名供者的外周血DNA,采用RSCA进行HLA-B位点分型,并与序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)分型结果进行比较,对于疑难标本采用测序鉴定.结果在90份标本中,87份(96.7%)可明确判定结果,其中有1份标本与PCR-SSP结果不一致,经测序鉴定RSCA结果正确;67份(74.4%)可直接指定等位基因型别.此外,1份标本(1.1%)因PCR扩增结果太弱而未能获得RSCA分型结果,2份标本只能确定1条等位基因,经测序发现另1条等位基因为已知等位基因,但RSCA数据库中没有其数据.随机选择20份标本进行RSCA重复性实验,重复率为100%.在PCR-SSP方法分型中,约有10%的标本需要重复1～3次方能判定结果.结论RSCA具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、大规模和低成本等优点,适用于大规模的无关移植供、受者的选择.
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