作者：周毅; 林乐岷; 宋纯; 许评; 宋春芳pth甲状旁腺功能低下症小鼠转基因血钙浓度悬液造血干细胞阳性克隆转染dna
摘要：目的探讨输注整合有甲状旁腺素(PTH)基因的造血干细胞对甲状旁腺功能低下症的治疗效果.方法将以pcDNA 3.1-PTH为模板扩增出的PTH基因插入到逆转录病毒载体MSCV中,得到含PTH基因的重组质粒,并转染PA317包装细胞,以抗生素Geneticin筛选阳性克隆,获得重组有PTH基因的浓缩病毒悬液,以其感染人脐血造血干细胞,然后注入甲状旁腺功能低下症模型小鼠血中,术后观察小鼠症状的改善情况、血PTH及血钙浓度变化情况.结果所获得的重组有PTH基因的浓缩病毒悬液,其病毒滴度为2×107 CFU/ml,PTH的分泌量为15 ng/48 h(106个细胞),未检测到有野生型病毒存在.实验组小鼠接受转染有PTH基因的血干细胞后,症状改善,血PTH及血钙浓度逐渐上升,并维持于接近正常水平;仅接受重组有PTH基因的浓缩病毒悬液的小鼠,短期内血PTH及血钙浓度明显升高,以后则呈缓慢下降趋势,并逐渐出现甲状旁腺功能低下症的表现;只接受造血干细胞移植的小鼠术后20 d左右全部死亡.结论甲状旁腺功能低下症小鼠接受整合有PTH基因的造血干细胞静脉输注可获得较长期的治疗效果.
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