作者:苏国强; 黄宗海; 俞金龙; 厉周; 范应方; ...kdr启动子靶向杀伤作用基因系统驱动ecv304细胞ls174t细胞株选择性杀伤作用流式细胞仪检测流式细胞术检测人血管内皮细胞旁观者效应cd基因体系腺病毒介导293细胞基因启动子体外感染不同浓度丙氧鸟苷杀伤效应细胞周期电镜观察
摘要:目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系,对人脐血管内皮细胞ECV304的选择性杀伤作用.方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV304细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5-氟胞嘧啶(5-fuorocytosine,5-FC )和/或丙氧鸟苷(ganciclovir,G CV),观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变.结果所得病毒对两种细胞细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加;表达KDR的E CV304细胞对前药的具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0 .01);融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0.01);且观察到该体系明显的旁观者效应.流式细胞术检测治疗后ECV304细胞G1期比率增多及S期细胞减少(P均<0 .01),同时,电镜下可见ECV304有凋亡和坏死改变.结论 KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞.
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