作者：蔡丽敏 王艳东 杨晶 孙建方肿瘤细胞培养的黑色素瘤基因肿瘤抑制细胞增殖生长抑制因子4
摘要：目的构建人生长抑制因子4基因的真核表达质粒，并将其转染入黑素瘤M14细胞，观察生长抑制因子4对M14细胞增殖的影响。方法通过RT—PCR法从人正常胃黏膜组织获得目的基因片段，将其克隆入空载质粒pCDNA3．1，构建真核表达载体pCDNA3．1-ING4，采用PCR及基因测序等方法进行鉴定。将其转染入黑素瘤M14细胞，检测生长抑制因子4的表达情况及对M14细胞增殖的影响。结果PCR所得产物为约750bp的DN段，与预测大小相符，DNA序列测定与报道结果一致。蛋白印迹及免疫细胞化学法均显示转染外源生长抑制因子4基因的M14细胞有更高的生长抑制因子4（ING4）表达，细胞活力及生长速度明显低于转染空载质粒的M14细胞和未转染的M14细胞。结论成功构建了重组人生长抑制因子4基因表达质粒pCDNA3．1-ING4，转染的外源生长抑制因子4基因可在细胞内表达并对M14细胞的增殖起抑制作用。
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