作者:陈贤祯; 程浩; 汤晓燕; 张行; 朱可建; 叶...基因沉默rna干预乳头状瘤病毒人
摘要:目的探讨RNA干预技术的两种形式在体外对人乳头瘤病毒(HPV)11型E7基因的沉默作用。方法化学合成1对小片段干扰RNA(siRNA-11E7)、同时构建3个短发夹状小RNA(shRNA)表达质粒(pRNAT-11E71^#、2^#、3^#),分别转染稳定表达HPV11E7的C57BL/6小鼠黑素瘤细胞系B16细胞株,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞转染前后靶基因mRNA的表达水平。结果siRNA-11E7转染细胞后6、12、24、48、72、96、120h对靶基因表达的抑制率分别为12.60%、31.41%、41.93%、42.93%、74.35%、32.71%、29.00%;最佳作用浓度为25nmol/L(抑制率70.06%),最低作用浓度可至3.13nmol/L(抑制率47.00%)。以0.4μg pRNAT-11E71^#、2^#、3^#及上述3个质粒等量混合转染细胞72h后对靶基因表达的抑制率分别达44.52%、59.26%、89.62%、54.09%,阴性质粒无干预作用。pRNAT-11E73^#作用6、12、24、48、72、96、120h对靶基因表达抑制率分别为0、17.50%、40.90%、42.40%、61.90%、51.50%、0%;最佳作用剂量0.2μg。结论siRNA及shRNA表达载体均可在体外安全高效地沉默HPV11E7基因的表达,其干预作用存在一定的量效性和时效性,且可能存在最佳作用浓度(剂量)和最佳作用时间。
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